mammalian cell culture process
Mammalian hlwb mus los ntawm cov txheej txheem ntawm cov ntaub so ntswg extraction, thawj kab lis kev cai, thiab subculture. Subculture tuaj yeem muab faib ua kab lis kev cai ntawm tes thiab kab lis kev cai ntawm tes raws li cov xwm txheej. Txhua txheej txheem tau piav qhia luv luv raws li hauv qab no:
Thawj kab lis kev cai: Tom qab cov ntaub so ntswg raug tshem tawm ntawm tus tsiaj, nws yog minced, kho nrog ntau yam enzymes (feem ntau trypsin), chelating agents (feem ntau yog EDTA) thiab txhua yam txoj kev (rov dua aspiration thiab pipette tshuab), thiab ces dispersed mus rau hauv ib tug neeg lub hlwb, Cultivated nyob rau hauv ib qho nruab nrab tsim nyog uas ua rau cov hlwb kom muaj sia nyob, loj hlob thiab sib npaug. Cov kab lis kev cai tseem ceeb ntawm tes feem ntau yog hais txog kab lis kev cai ntawm tes hauv 10 nqe lus tom qab cov hlwb raug tshem tawm ntawm tus tsiaj.
Tom qab thawj kab lis kev cai ntawm tes, kev faib tawm ntawm tes thiab kev yug me nyuam, kab lis kev cai maj mam nce, kev loj hlob nyob rau hauv kab lis kev cai qhov chaw, thiab tom qab ntawd kev sib cuag nrog ib leeg, ua rau kev sib cuag inhibition, thiab qhov kev loj hlob qeeb qeeb los yog nres. Nws yuav tsum tau rov qab noob rau hauv cov kab lis kev cai tshiab rau subculture.
Passaging (kab lus): Thawj lub hlwb raug muab tshem tawm ntawm kab lis kev cai, lub cell ncua kev kawm ntawv yog npaj, thiab muab faib ua ob los yog ntau tshaj kab lis kev cai flasks rau ntxiv kab lis kev cai, uas yog hu ua subculture.
Cell Kab: Ib kab ntawm tes yog ib kab ntawm tes tom qab thawj nqe lus hauv thawj kab lis kev cai. Yog hais tias lub sij hawm ciaj sia taus ntawm ib kab ntawm tes yog txwv, nws yog hu ua finite cell kab. Ib txoj kab xovtooj ntawm tes uas tau txais qhov muaj peev xwm tsis muaj kev sib deev thiab tseem muaj sia nyob yog hu ua kab xov tooj txuas ntxiv lossis ib txoj kab ntawm tes tsis kawg.
Cell kab: Los ntawm cov kab uas txheeb xyuas cov kab mob lom neeg, cov neeg ntawm cov xov tooj ntawm tes tsim los ntawm ib leeg ntawm tes cais, kab lis kev cai lossis kev tshuaj ntsuam yog hu ua kab ntawm tes. Cov neeg cell ntawm cov duab sib txawv tom qab ntawd raug cais tawm thiab coj los ntawm cov kab ke tseem ceeb los ua subclones.
Mammalian cell culture tej yam kev mob
Cov hlwb sib txawv yuav tsum muaj kab lis kev cai hauv txhua theem
1. Sterile thiab non-toxic ib puag ncig: aseptic kho ntawm kab lis kev cai nruab nrab thiab tag nrho cov khoom siv kab lis kev cai; ntxiv cov tshuaj tua kab mob rau hauv kab lis kev cai nruab nrab los tiv thaiv kev kis kab mob thaum lub caij kab lis kev cai; tsis tu ncua hloov ntawm kab lis kev cai nruab nrab kom tshem tawm cov metabolites los tiv thaiv kev puas tsuaj rau cov kab lis kev cai.
2. Khoom noj khoom haus: Cov kua nruab nrab nruab nrab muaj suab thaj, amino acids, txhawb kev loj hlob, dej, inorganic ntsev, kab kawm, thiab lwm yam. Nws yog feem ntau yuav tsum tau ntxiv cov khoom ntuj xws li ntshav thiab ntshav.
3. Qhov ntsuas kub zoo thiab tus nqi pH: Qhov kub zoo tshaj plaws rau tib neeg thiab tsiaj txhu yog 36 ± 0.5 degree . Tus nqi pH tsim nyog yog 7.2-7.4.
4. Gas ib puag ncig: Cov pa ib puag ncig feem ntau yog "95 feem pua ntawm huab cua ntxiv rau 5 feem pua carbon dioxide" cov roj sib xyaw. Oxygen yog cov roj tsim nyog rau cov cellular metabolism, thiab carbon dioxide tswj cov pH ntawm nruab nrab.