Cov tshuaj tiv thaiv kab mob polymerase (PCR) yog ib txoj hauv kev paub zoo tshaj plaws hauv kev tshawb fawb txog lub neej.
PCR daim hlau yog ua los ntawm cov yas thawj-chav rau kev tuav zoo thiab kev soj ntsuam ntawm cov qauv sau los yog cov txiaj ntsig.
Lawv muaj nyias, cov phab ntsa uas muab cov cua sov hloov pauv.
Hauv kev npaj rau daim ntawv thov tiag tiag, cov feem me me ntawm DNA lossis RNA raug cais tawm thiab khaws cia hauv PCR daim hlau.
PCR daim hlau ua tau zoo heev ntawm kev sib khi thaum tshav kub kub thiab tseem txwv tsis pub khiav ntawm tshav kub.
Txawm li cas los xij, vim tias PCR daim hlau ua tau zoo thiab txhim khu kev qha, lawv muaj qhov ua yuam kev thiab tsis raug thaum ua cov qauv.
Yog li ntawd, yog tias koj txaus siab tau txais cov ntawv zoo PCR zoo. Nws yog qhov zoo tshaj plaws hu rau PCR phaj chaw tsim khoom. Nrog rau qhov no, koj tuaj yeem paub tseeb tias yuav tau txais tus nqi zoo tshaj.
Hauv qab no yog qee qhov kev ceev faj kom tsis txhob muaj kev sib kis ntawm cov tshuaj reagents lossis cov qauv thiab tiv thaiv cov txiaj ntsig tsis raug.
Tshuaj tua kab mob ib puag ncig
Cov txiaj ntsig tsis zoo lossis tsis zoo vim muaj cov impurities tuaj yeem ua rau koj tsis ntseeg cov txiaj ntsig.
Cov impurities thiab cov kab mob tuaj yeem muaj ntau hom, xws li DNA tsis cuam tshuam los yog tshuaj lom neeg ntxiv, uas thaum kawg txo qhov kev ua tau zoo thiab kev ua tau zoo ntawm cov tshuaj tiv thaiv.
Muaj ntau txoj hauv kev los txo cov kab mob sib kis ntawm PCR daim hlau.
Siv cov lus qhia lim kom tsis muaj menyuam yog lwm txoj hauv kev los tiv thaiv impurities los ntawm kev nkag mus rau cov qauv los ntawm cov pipette.
Cov khoom siv huv huv, suav nrog cov kav dej thiab cov khib nyiab, yog muab tshwj xeeb rau kev siv PCR. Qhov no yuav lav qhov tsis raug hloov pauv ntawm cov impurities lossis cov kab mob sib kis nyob ib puag ncig ntawm chav kuaj.
Siv tshuaj bleach, ethanol rau ntawm pipettes, racks, thiab lub rooj zaum kom tshem tawm cov kab mob.
Muab qhov chaw tshwj tseg rau txhua qhov kev cuam tshuam PCR txhawm rau txo cov kab mob sib kis ntxiv.
Siv cov hnab looj tes huv ntawm txhua kauj ruam thiab hloov lawv tsis tu ncua.
PCR phaj
Xyuas qhov concentration thiab purity ntawm lub template.
Kev huv huv ntawm cov rooj zaum thiab cov cuab yeej siv los txheeb xyuas cov qauv siv PCR yuav tsum tau tswj xyuas. Nws yog ib qho tseem ceeb kom paub tseeb qhov purity ntawm cov qauv ua ntej kev soj ntsuam thiab ua.
Feem ntau, tus ntsuas ntsuas yuav siv sij hawm rau hauv tus account qhov concentration thiab purity theem ntawm DNA qauv.
Lub absorbance piv ntawm 260nm / 280nm yuav tsum tsis txhob tsawg tshaj li 1.8. Tom qab ntawd cov impurities tau txheeb xyuas siv wavelengths ntawm 230nm thiab 320nm.
Hauv ib qho piv txwv, chaotropic ntsev thiab lwm cov organic tebchaw tau kuaj pom ntawm qhov nqus ntawm 230 nm. Ib txhij tshawb xyuas thiab txheeb xyuas qhov tsis sib xws hauv DNA cov qauv ntawm absorbance ntawm 320nm.
Tsis txhob overloading PCR daim hlau thiab cov khoom
Txawm hais tias nws yog ntshaw kom khiav ntau yam khoom tib lub sijhawm, nws tuaj yeem ua rau muaj kev sib kis ntawm PCR daim hlau.
Overloading PCR daim hlau nrog cov khoom sib txawv yog khib nyiab thiab ua rau nws nyuaj rau txheeb xyuas cov qauv.
Khaws cov ntaub ntawv ntawm aliquots ntawm PCR reagents
Nruam khov / thaw cycles thiab nquag siv aliquots yuav ua rau PCR reagents, enzymes, thiab DNTPs los ntawm recrystallization.
Ib txwm siv zog los saib xyuas tus nqi ntawm aliquots siv thaum npaj cov qauv rau kev tshuaj xyuas.
Qhov nyiam LIMS yog qhov tsim nyog rau kev tswj cov khoom lag luam thiab ntau npaum li cas ntawm cov tshuaj reagents thiab cov qauv kom khov los yog thawed.
Xaiv qhov zoo tshaj plaws annealing kub.
Xaiv thiab siv qhov ntsuas kub tsis zoo yog lwm txoj hauv kev PCR cov txiaj ntsig muaj qhov yuam kev.
Qee lub sij hawm cov lus teb tsis mus raws li kev npaj. Qhov kub annealing yuav tsum tau txo qis kom txhawb kev ua tiav cov tshuaj tiv thaiv.
Txawm li cas los xij, txo qhov kub thiab txias yuav ua rau muaj qhov tsis zoo thiab primer-dimers.
Thaum siv PCR daim hlau, nws yog ib qho tseem ceeb kom paub meej tias qhov kev soj ntsuam ntawm lub melting nkhaus vim nws yog ib qho kev qhia zoo rau kev xaiv qhov tseeb annealing kub.
Primer tsim software pab tsim, muab qhov tseeb annealing kub, ncaj qha txo qhov yuam kev hauv PCR daim hlau.
pcr paj
